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乳癌細(xì)胞培養(yǎng)基及培養(yǎng)基膠原酶的消化法實驗步驟
更新時間:2014-07-18   點(diǎn)擊次數(shù):934次

乳癌細(xì)胞培養(yǎng)基及培養(yǎng)基膠原酶的消化法實驗步驟

此法曾用于乳癌細(xì)胞的培養(yǎng),具體程序是:

 ?。?)先是用0.5%胰蛋白酶和0.02%EDTA(1:1)混合液漂洗培養(yǎng)基細(xì)胞一次,然后再換成新的混合液繼續(xù)消化,并在倒置顯微鏡下窺視和不時搖動培養(yǎng)瓶,到半數(shù)細(xì)胞脫落下來后,便立即停止消化;

 ?。?)把消化液吸入離心管中,離心去上清,吸入另瓶中,加培養(yǎng)液置溫箱中培養(yǎng);向原瓶內(nèi)也補(bǔ)加新的培養(yǎng)基液繼續(xù)培養(yǎng)。用此法處理后,成纖維細(xì)胞比腫瘤細(xì)胞易先脫落。經(jīng)過幾次反復(fù)處理,可能把成纖維細(xì)胞除凈。

本法是利用成纖維細(xì)胞對膠原酶較為敏感的特點(diǎn),通過消化進(jìn)行選擇。

  (1)可用0.5mg/ml的膠原酶消化處理,邊消化邊在倒置顯微鏡下窺視,當(dāng)發(fā)現(xiàn)成纖維細(xì)胞被除掉后,即終止消化;

 ?。?)用Hanks洗滌處理一次后,更換新培養(yǎng)基液,繼續(xù)培養(yǎng),可獲純凈腫瘤細(xì)胞。如成纖維細(xì)胞未被除凈,可再次重復(fù)。

 

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