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肺炎衣原體ELISA法檢測步驟
更新時間:2015-12-09   點擊次數(shù):873次

    肺炎衣原體感染廣泛存在于*,以隱性感染為主。其臨床表現(xiàn)多樣,主要引起人非典型肺炎,還可引起咽炎、支氣管炎、虹膜炎、肝炎、心內(nèi)膜炎及結(jié)節(jié)性紅斑等,亦是艾滋病、白血病等疾病繼發(fā)感染的重要病原,且與冠心病的發(fā)生相關(guān),嚴重威脅人類健康。常見檢查方法為ELISA法檢測肺炎衣原體抗體。ELISA試劑盒

1. 配制洗滌液 l瓶濃縮洗滌液加475ml蒸餾水。配好的洗滌液短期內(nèi)可置室溫環(huán)境中,長期可存于2—8℃環(huán)境中。
2. 配制酶聯(lián)物 按1:101倍稀釋,即取1u1濃縮酶聯(lián)物加酶聯(lián)物稀釋液1 000ul(根據(jù)檢測標本數(shù)量確定稀釋量),未用完的丟棄。
3.待試劑盒平衡至室溫后,待測標本按1;51稀釋,即取4tA血清與200u1標本稀釋液混合。

4. 將稀釋標本置37℃環(huán)境中20min。

5. 各加100ul陽性、弱陽性、陰性對照及已稀釋待測標本上清液于相應孔中,空白對照孔加100u1標本稀釋液,蓋好反應板,置37℃環(huán)境中30min。ELISA試劑盒

6. 甩盡板中液體,每孔用200~300ul洗滌液洗5次,每次均需拍干。

每孔加酶聯(lián)物100~1,蓋好反應板,置37℃環(huán)境中30min。

8.甩盡板中液體,洗5次,每次拍干。

9. 加底物A、B各1滴或各50tzl,混勻,置37℃環(huán)境中15min。
10.取出,加終止液1滴,用酶標儀450nm測其OD值。若肉眼觀察則不加終止液,直接判斷結(jié)果。

注意事項:

1.本實驗結(jié)果須結(jié)合臨床表現(xiàn)、病史作出診斷后,方可采取適當臨床處理。

2 . 試劑盒雖然含有消除干擾因子的物質(zhì),但仍可能有少量標本難以除盡干擾。因此,如某標本多項IgM均為陽性,應考慮RF的干擾。ELISA試劑盒

 

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